《表1 上下游引物信息表Tab.1 Upstream and downstream primer information》

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《siRNA沉默POLE2基因表达对非小细胞肺癌细胞增殖的影响》

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（1） 总RNA的提取:使用Trizol试剂盒在A549、NCI-H1975、NCI-H1299细胞中提取总RNA，Nanodrop 2000/2000C分光光度计分析测定所抽提RNA的浓度及质量。（2）c DNA的合成:取2μg总RNA，1μl Oligo d T（0.5μg/μl），1μl M-MLV-RTase（200 U/μl），于42℃水浴反应1 h，70℃水浴10 min获取c DNA。PCR引物序列委托广州市锐博生物科技有限公司设计完成（上下游引物信息见表1，GAPDH为内参引物）。（3）PCR反应:以同一c DNA为模板，在12μl反应体系内扩增。反应条件:95℃预变性5 min后，95℃50 s，55℃1 min，72℃1 min，循环35次。最后72℃延伸7 min。取5μl PCR产物于1.8%琼脂糖凝胶电泳（80 V，30 min），凝胶成像仪分析RT-PCR产物带的吸光度值。用POLE2/GAPDH扩增量表示细胞的相对表达水平。