《表2 引物信息Table 2 Primer information》

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《德氏乳酸菌对黄河鲤皮肤黏液中免疫和抗氧化指标以及皮肤中抗菌肽基因表达的影响》

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取皮肤组织0.1 g左右，参照Trizol使用说明书，提取总RNA，然后测定其浓度和质量，一般OD260/OD280在1.8~2.0之间表示质量较好，最后稀释成相同的浓度，进行c DNA的反转。参照大连宝生物公司提供的试剂盒说明书进行c DNA的反转，反应程序:第1步，42℃反应40 min；第2步，90℃反应2 min；最后4℃保存。之后10倍稀释，以备实时荧光定量PCR用。用Primer 5软件设计引物，由上海英捷公司合成，引物序列见表2。按照SYBR Prime ScriptTMRT-PCR Kit（Ta KaRa公司）使用说明进行实时荧光定量PCR，反应条件:94℃5 min→45个循环（每个循环中94℃变性30 s，55.9℃退火30s，72℃延伸30 s）→72℃延伸7 min。选用β-肌动蛋白（β-actin）作为内参基因，用2-ΔΔCt法计算目的基因肝表达抗菌肽1（Leap-1）和肝表达抗菌肽2（Leap-2）的相对表达量。