《表1 构建突变型D50A、E122A的特异性引物》

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《单增李斯特菌核糖核酸酶Rnase Ⅲ RncS氨基酸突变对其降解RNA活性的影响》

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根据前期扩增的rncS基因序列及生物信息学分析结果，通过Primer 5.0软件设计扩增rncS基因突变型D50A、E122A的特异性引物:D50A、E122A fragment1的扩增引物分别为H1、H2和R1、R2；D50A、E122A fragment1的扩增引物分别为H3、H4和R3、R4；重叠延伸PCR的引物分别为H1、H4和R1、R4；分析表达载体pET-32a（+）多克隆位点的情况，在H1、H4和R1、R4引物的5’端分别加酶切位点Eco RⅠ和XhoⅠ（下划线）及保护性碱基（斜体）（表1） 。引物由北京六合华大基因生物公司合成。