《表1 以GAPDH为内参的目的基因引物设计情况》

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《GPC6基因RNA干扰病毒载体的构建及在鼻咽癌传代细胞株中的表达》

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收集转染细胞，按照上海普飞公司Trizol试剂盒说明书抽提目的细胞total RNA，按照M-MLV试剂盒（美国Promega公司）说明将RNA反转录获得cDNA用（美国Promega公司），按照日本TAKARA SYBR Master Mixture试剂说明进行目的基因RT-qPCR表达检测。注:反应体积包括:SYBR premix ex taq:10.0μL，上游引物（2.5μM）0.5μL，下游引物（2.5μM）0.5μL，cDNA 1.0μL，RNase-Free H2O加至总体积20μL。qPCR结束后，制作熔解曲线，反应条件为:95℃1min；冷却至55℃，使DNA双链充分结合；从55℃开始到95℃，每增加0.5℃，保持4s，同时读取吸光值。选取GAPDH做内参，采用2-△△Ct法分析数据。以GAPDH为内参的目的基因引物设计见表1。