《表1|GDNF与内参GAPDH基因引物序列》

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《胶质细胞神经营养因子诱导骨髓间充质干细胞向功能性神经元分化的机制》

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表注：GDNF：胶质细胞源性神经营养因子

取第3代骨髓间充质干细胞，以1×105/孔细胞密度接种于6孔板，随机分为Ad-GDNF-GFP转染组、AdGFP转染组及未转染对照组。以感染复数为100，Ad-GDNF-GFP和Ad-GFP转染2 h，加入1 m L含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液终止转染，空白对照组只加入1 m L含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液，于37℃体积分数5%CO2培养箱培养。培养1，3，5，7，9，11 d，依据RNeasy mini kit试剂盒提取各组细胞总RNA，采用First Strand c DNA kit试剂盒方法进行反转录为c DNA，以GAPDH为内参，进一步以Sybr-Green法行实时荧光定量PCR扩增，对比检测各组细胞GDNF m RNA的表达。PCR扩增条件：95℃预变性10 min，95℃变性20 s，55℃退火20 s，72℃延伸30 s。共45次循环，PCR各引物序列（上海汉恒生物技术有限公司合成）见表1，ΔΔCt法行PCR产物相对定量分析，重复实验5次，并以柱形图表示统计学分析结果。