《表4 针刺和枝4个差异性表达基因q RT-PCR引物》

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《‘枸头’橙针刺和枝的转录组分析》

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随机选择测序结果筛选得到的4个表达显著差异的基因，进行q RT-PCR验证分析，所用引物通过Primer Primer 5软件设计（表4）。分别取和转录组测序同期针刺和嫩枝样品，采用植物RNA快速提取试剂盒（RK16-50T，钟鼎生物公司）提取植物组织样品RNA，以反转录试剂盒（Prime ScriptⅡ1stStrand c D-NA Synthesis Kit，Ta Ka Ra）合成的c DNA为模板，18S-r RNA为内参。采用宝生物工程（大连）有限公司的SYBR Premix Ex Taq （Tli RNase H Plus）试剂盒，在荧光定量PCR仪Light Cycler （Bioer，杭州博日）进行荧光定量检测。扩增条件：95℃30 s，循环1次；95℃5 s，60℃20 s，循环40次，72℃单点检测信号。每个样品设3次技术重复，采用2-驻驻Ct法对各基因进行相对定量分析。