《表1 实时荧光定量PCR引物序列》

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《一氧化氮合酶、环氧合酶-2在不同类型胃食管反流病中的表达及意义》

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nNOS:神经元型一氧化氮合酶；iNOS:诱导型一氧化氮合酶；COX-2:环氧合酶-2.

:（1）总RNA提取:取液氮速冻标本，研磨裂解后，利用Trizol试剂盒提取总RNA，并采用紫外分光光度计（Alpha1型，上海谱元仪器有限公司）测定RNA纯度，吸光度（A）比值A260/A280≥1.8提示RNA提取成功；（2）mRNA逆转录为cDNA:利用反转录试剂盒将总RNA反转录为cDNA；（3）qRT-PCR扩增:以反转录得到的cDNA作为模板进行PCR扩增，以GAPDH基因作为内参照，NOS引物序列由上海生物工程技术公司合成，参照NCBI GenBank提供的人类基因序列进行设计.COX-2、GAPDH引物序列见表1.PCR反应条件:94℃预变性60 s，92℃变性30 s，56℃退火30 s，74℃延伸30 s，重复38个循环.利用用2-△△Ct法对组织中NOS mRNA及COX-2 mRNA相对表达量进行计算，检测中所采用的引物、Trizol试剂盒均有上海生物工程技术公司提供，其余试剂由北京奥科生物技术有限公司，试剂盒检测时严格按照试剂盒说明书进行.