《表1 实验所用引物：沙眼衣原体包涵体膜蛋白CT225与宿主波形蛋白存在相互作用》

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《沙眼衣原体包涵体膜蛋白CT225与宿主波形蛋白存在相互作用》

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以He La细胞RNA逆转录的c DNA为模板，与pc DNA3.1（+）His/Myc和p CMV-N-Flag载体进行重组，依据PCR引物设计原则设计特异性引物（表1），通过PCR扩增VIM、CT225目的片段。PCR反应体系（100μL）：模板/CT基因组1-20 ng，5×Prime STAR Buffer 20μL，d NTP Mixture（2.5 mmol/L） 8μL，特异性上、下游引物（10μmol/L）各4μL，高保真DNA聚合酶（5 U/μL） 1μL，dd H2O补齐100μL。PCR反应条件：98°C 5 min；98°C 10 s，55°C 30 s，72°C 10 min，35个循环；72°C 10 min。使用限制性内切酶酶切、T4 DNA连接酶16°C连接过夜。连接好的质粒采用热休克法转化入大肠埃希菌XL1-Blue感受态细胞，37°C温箱内LB固体培养基长出菌落后筛选阳性菌落。用大肠埃希菌对质粒进行扩增和纯化，大肠埃希菌在LB液体培养基中37°C、200 r/min培养16 h，并配以适当的氨苄青霉素。用质粒提取试剂盒进行质粒提取，送华大基因公司进行测序。