《表3 本实验所用引物:白念珠菌内质网-质膜连接蛋白Ist2对内质网压力应答的调控作用》

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《白念珠菌内质网-质膜连接蛋白Ist2对内质网压力应答的调控作用》


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将过夜活化的WT-PPRB1-GFP和ist2Δ/Δ-PPRB1-GFP菌株分别转接至10 mL YPD+Uri培养基中,调整初始A600 nm=0.1,于30℃摇床中培养4 h.随后对菌液分别做以下处理:添加4μg/mL TN,1 mmol/L EGTA,4μg/mL TN+1 mmol/L EGTA,无添加,重新置于30℃摇床中培养2 h.1500×g离心2 min收集菌体,弃上清.用ddH2O洗涤1~2次,相同条件下离心收菌.用ddH2O重悬所得菌体.采用荧光酶标仪,在激发波长488 nm,发射波长520 nm条件下,测定荧光强度.同时取一定量菌悬液测定A600 nm.计算一定数量细胞的相对荧光强度.