《表1 引物：流感病毒NS1蛋白与宿主蛋白DOK6的相互作用研究》

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《流感病毒NS1蛋白与宿主蛋白DOK6的相互作用研究》

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根据DOK6参考序列（gene ID:220164）、A/WSN/1933（H1N1）流感病毒NS1蛋白参考序列（LC333189.1）设计引物。提取A549细胞RNA，反转录获得cDNA，以其为模板，采用引物DOK6-F-p CAGGS/DOK6-R-p CAGGS，扩增DOK6基因片段。将p CAGGS-Flag与p CAGGS-V5经KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后，与上述扩增的DOK6基因片段同源重组构建p CAGGS-Flag-DOK6与p CAGGS-V5-DOK6真核表达质粒。利用构建的p CAGGS-Flag-DOK6质粒为模板，采用引物DOK6-F-Bi FC/DOK6-R-Bi FC扩增DOK6基因全长片段，采用引物DOK6-F-Bi FC/DOK6-R339-Bi FC PCR扩增DOK6的Pleckstrin同源结构域（Pleckstrin homology domain，PH）（aa1～aa113）基因片段，采用引物DOK6-F391-Bi FC/DOK6-R714-Bi FC PCR扩增DOK6的PTB结构域（aa131～aa238）基因片段，采用引物DOK6-F-Bi FC/DOK6-R714-Bi FC PCR扩增DOK6结构域PH+PTB（aa1～aa238）基因片段，采用引物DOK6-F391-Bi FC/DOK6-R-Bi FC PCR扩增DOK6结构域PTB+C-Terminal（aa131～aa331）基因片段（图1）。将以上扩增片段，与经SacⅠ/XhoⅠ酶切的p CAGGS-VN与p CAGGS-VC载体同源重组，分别构建重组质粒：p CAGGS-DOK6-VN、p CAGGS-DOK6-VC、p CAGGS-PH-VC、p CAGGS-PTB-VC、p CAGGS-（PH+PTB）-VC、p CAGGS-（PTB+C-Ter）-VC。以p HH21-WSN-NS1质粒为模板，采用引物NS1-F-Bi FC/NS1-R-Bi FC PCR扩增NS1全长基因片段，按照上述方法构建重组质粒p CAGGS-NS1-VN、p CAGGS-NS1-VC。所有重组质粒均利用p CAGGS上下游通用引物PCR鉴定，并通过测序进一步鉴定。上述引物具体信息见表1。