《表1 梯度电源故障灯：甘蓝型油菜BnMAPK1的原核表达、亚细胞定位及酵母双杂交文库筛选》

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《甘蓝型油菜BnMAPK1的原核表达、亚细胞定位及酵母双杂交文库筛选》

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以p ET28a-Bn MAPK1测序菌液为模板，用特异引物Y2H-Bn MAPK1-F和Y2H-Bn MAPK1-R扩增Bn MAPK1 ORF区，采用Eco R I和Bam H I双酶切法，构建p GBKT7-Bn MAPK1的Bait载体，所用引物见表1。PCR鉴定后的阳性克隆测序正确后，参考Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid System操作手册制作酵母感受态细胞。按照小量转化法将p GBKT7-Bn MAPK1质粒与p GADT7空白质粒共转化至酵母Y2Hgold感受态中，分别涂布SD/-Leu/-Trp和SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp平板，30℃倒置培养3～5 d后，观察菌落生长状况。阳性对照为p GBK-53与p GAD-T，阴性对照为p GBK-Lam与p GAD-T，空白对照为Y2Hgold菌株。