《表1 引物序列：弓背青鳉(Oryzias curvinotus)Kera基因克隆及表型比较分析》

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《弓背青鳉(Oryzias curvinotus)Kera基因克隆及表型比较分析》

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参考笔者实验室已获取的弓背青鳉转录组中Kera序列进行引物设计（表1）。日本青鳉（Oryzias latipes XM＿004083061.4）与弓背青鳉同为青鳉属，其Kera基因序列相似度很高。以弓背青鳉眼睛c D-NA为模板，扩增目的片段。PCR反应体系为:模板2μL，上下游引物各2μL（5μmol/L），2×PCR Mix Buffer 15μL，补水至终体积30μL。反应程序:94℃预变性3 min；94℃变性30 s；60℃退火30 s；72℃延伸30 s；经过35个循环；72℃延伸7 min。利用1%琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测，拍照并记录结果。使用凝胶回收试剂盒纯化PCR产物，将纯化得到的目的片段连接到克隆载体PMD-19，转化至DH5α大肠杆菌，阳性克隆送至上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序。