《表1 PCR引物设计碱基序列》

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《人根尖牙乳头干细胞条件培养基体外诱导成牙分化的研究》

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取第5代DPCs，以2×104cells/m L接种于6孔板中，实验组每天分别加入SCAP-CM（H）和SCAP-CM(N）100μL，空白对照组加入等体积的普通DMEM/F12培养基，连续诱导3天。在细胞培养的第3d，使用Trizol法分别提受试细胞的总RNA，采用Thermo逆转录试剂盒将m RNA逆转成c DNA，取200μL PCR管，配制20μL反应体系，每个反转录产物配制3管。检测Runx2、ALP、DSPP、OCN和DMP-1共5个目的基因以及β-actin内参基因表达（引物设计见表1）。PCR扩增程序设置为：预变性95℃，10 min：循环（40次）95℃：15s→60℃，60s：溶解曲线75℃→95℃，每20 s升温1℃。计算目标基因与内参基因的相对Ct值，即△Ct，组间同一基因相对表达水平利用2—△△CT来表示。