《表1 RT-PCR引物碱基序列》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《鹿茸Ⅰ型胶原对MC3T3-E1细胞TGF-β1/Smad基因蛋白表达的影响》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

应用RT-PCR方法检测TGF-β1、Smad2、Smad3基因的表达水平。取传代3次，处于对数生长期的MC3T3-E1细胞，用0.25%胰酶消化，将浓度为2×104个/m L细胞接种在24孔板中，待细胞贴壁后，进行分组给药，再连续培养48 h后进行实验。收集细胞，采用Trizol一步法提取RNA。琼脂糖电泳检测总RNA，取适量RNA进行反转录实验，其余加入无水乙醇1 mL混匀，置于-80℃保存。按照Bio Teke super RT Kit说明书配制反转录反应液。设置程序:1) 45℃，50 min；2) 70℃，10 min。反应结束后冰浴，4℃保存备用。待反应结束后，通过超微量紫外分光光度计检测反转录液中c DNA的浓度。按照2×SYBR RT-PCR premixture Kit说明书配制反转录反应液。采用“三步法”进行RT-PCR实验，设置反应程序:95℃，起始模板预变性。1) 95℃，20 s；2) 65℃，10 s；3) 72℃，30 s，循环次数为40。记录各组目的基因的融解曲线和扩增曲线。内参基因为β-actin，记录并分析各组目的基因的相对表达量，进行差异性比较。引物序列，见表1。