《表1 sh RNA单链核苷酸序列》

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《kdm4A在斑马鱼细胞低温胁迫过程中的作用》

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在NCBI网站上对斑马鱼kdm4aa和kdm4ab基因的编码区进行分析，选择在基因内部无复杂二级结构和重复序列的区域进行靶位点设计，根据sh RNA引物设计原则，在该网站http://www.broad institute.org/rnai/public/seq/search上设计了2个单链短发夹状寡核苷酸干扰序列，分别命名为sh-kdm4aa和sh-kdm4ab。并且还设计了一个不起任何作用的茎环状发夹结构为阴性对照，命名为sh-nc。然后将寡核苷酸序列送至生工生物工程（上海）股份有限公司合成。sh RNA包括两个短反向重复序列，中间由一个茎环（Loop）序列分隔，组成发夹结构，由polⅢ启动子调控。在CDS区后连接5～6个胸腺嘧啶T作为RNA聚合酶Ⅲ的转录终止子。sh RNA序列两个互补的寡核苷酸oligo两端含有AgeⅠ和Eco RⅠ限制性酶切位点（表1）。