《表1 ZBTB18 sh RNA核酸序列》

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《转录因子ZBTB18对结直肠癌细胞转移的影响》

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通过Ambion网站，针对ZBTB18 m RNA序列（NM＿205768）设计了3组短发夹RNA（short-hairpin RNA，sh RNA），以便从中筛选得到最优的序列（表1）。把sh RNA-F（Foward）和shRNA-R（Reverse）等量混合后，置于沸水中，让其缓慢降至室温进行复性，短暂离心后置于4℃保存；将pLKO.1-puro慢病毒载体用限制性内切酶AgeI和EcoRI进行酶切及胶回收；把复性的shRNA双链与酶切处理的pKLO.1-puro质粒进行连接，连接反应用DNA ligation kit（6022Q，Takara）进行，具体操作参考试剂盒说明书。连接成功的质粒进行Sanger测序鉴定并制备慢病毒。