《表1 qPCR引物序列：微小RNA-18a-3p靶向调控HEPN1及对骨肉瘤细胞迁移侵袭的影响》

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《微小RNA-18a-3p靶向调控HEPN1及对骨肉瘤细胞迁移侵袭的影响》

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注:F，上游引物；R，下游引物

向1×105个细胞中加入1ml TRIzol提取总RNA，以2μg总RNA为模板，采用All-in-One miRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit进行miR-18a-3p的逆转录反应，而HEPN1的逆转录反应则采用SuperScriptTMIV First-Strand Synthesis System，随后以逆转录反应溶液为模板，借助TB GreenFast q PCR Mix和LightCycler 480 System进行qPCR，反应体系:TB Green Fast q PCR Mix（2×）12.5μl、上下游引物各1μl和DNA模板2μl，灭菌水补齐至25μl；反应条件:95℃30 s，40个循环的95℃5 s和60℃10 s。采用2-ΔΔCt表示miR-18a-3p相较于U6及HEPN1相较于GAPDH的相对表达量。引物序列见表1。