《表1 荧光定量PCR引物序列》

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《MMP伴喘息患儿血清NF-κB、HMGB1表达与炎性细胞因子水平的相关性及其诊断价值》

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取一试管血清，应用Trizol-氯仿-异丙醇-乙醇法提取血清中总RNA，并按照试剂盒操作步骤逆转录合成cDNA，试剂盒购自上海吉凯基因化学技术有限公司。利用Primer 5软件设计目的基因和内参引物，内参采用3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH），以上引物由上海吉凯基因化学技术有限公司设计完成，引物序列见表1。应用荧光定量PCR检测各组血清NF-κB、HMGB1表达水平，仪器为瑞士Roche公司生产的Cobas 480荧光定量PCR仪，反应条件：95℃，3min；95℃，30s；60℃，35s，共40个循环，经过40个循环扩增后收集荧光信号，根据目的因子、内参GAPDH的循环阈值（Ct），使用2-ΔΔCt法计算相对表达量：ΔCt=Ct（目的因子）-Ct(GAPDH）；ΔΔCt=ΔCt-ΔCt（对照样本），每个样本设计3个复孔，取3个复孔的平均值作为相对表达量。