《表2 选择性扩增各因素水平正交试验设计》

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《穿心莲MSAP反应体系的优化及引物筛选》

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将预扩增最佳体系的产物稀释到合适倍数作为模板，以E03和HM06为引物组合进行选择性扩增，采用五因素五水平的L25（55）正交试验对预扩增产物的模板量、Taq DNA聚合酶、引物、d NTPs及Mg2+的量进行优化，利用正交试验设计反应条件（表2）。选择性扩增的PCR程序:94℃2 min；94℃30 s，65℃30 s，72℃1 min（共13个循环，每个循环退火温度下降0.7℃）；72℃5 min；94℃30 s，56℃30 s，72℃1 min（共10个循环）；72℃5 min。PCR扩增产物用1.0%琼脂糖凝胶进行检测。