《表1 预扩增体系各因素水平正交试验设计》

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《穿心莲MSAP反应体系的优化及引物筛选》

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根据前期预实验初步确定预扩增的各因素浓度范围，以连接产物为模板，E-pre与HM-pre为引物进行预扩增反应，反应总体积25μL。运用正交试验设计L25（55）对预扩增体系中的连接产物、Taq DNA聚合酶、引物、d NTPs、Mg2+等5个因素（成分）的用量进行考察，利用正交试验设计最佳反应条件（表1）。PCR扩增程序为:94℃2 min；94℃30 s，56℃30 s，72℃1 min，共30个循环；72℃5 min；4℃保存。预扩增产物用1.0%琼脂糖凝胶电泳检测。