《表3 整车参数：棉花乙醇酸氧化酶(Glycolate oxidase)基因的克隆及表达分析》

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《棉花乙醇酸氧化酶(Glycolate oxidase)基因的克隆及表达分析》

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采用改良的CTAB法提取棉花总DNA。利用宝生物公司RNAiso Kit试剂盒提取棉花叶片和根组织的总RNA，并采用UEIris II RT-PCR system for FirstStrand c DNA Synthesis（with ds DNase)试剂盒（货号R2028，该产品购于US Everbright誖Inc.）以总RNA为模板反转录合成c DNA。以棉花总DNA和反转录获得的c DNA为模板，根据棉花基因组数据库数据所设计的基因特异引物（GF和GR）和启动子克隆特异引物（PGF和PGR）（表3）对目的基因和其启动子序列进行PCR扩增。将扩增产物和载体p MT19 （宝生物，大连）16℃过夜连接并转化DH5α后，在含有Amp的固体LB培养基中过夜培养，挑取单菌落于1 m L加Amp的液体LB中，37℃振荡培养3 h后进行菌液PCR鉴定后送样测序(金唯智，中国）。