《表2 RT PCR实验所用引物Tab.2 Primers used in RT PCR》

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《水稻簇生穗基因CPB4的精细定位》


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用RNA提取试剂盒提取TQ和T637植株幼穗的总RNA,并用逆转录酶合成cDNA第一链.内参OsActin和BR相关基因的RT PCR引物如表2所示.荧光染料采用SYBR?Premix Ex Taq TMⅡ(购自TaKaRa生物公司).RT PCR反应体系为25μL:SYBR 12.5μL,10mmol/L PCR正向引物1μL,10mmol/L PCR反向引物1μL,模板cDNA 2μL,用灭菌水补足体系;每次实验每个样品重复3次.采用iCycler iQTM real-time quantitative PCR仪(Bio-RAD),通过标准曲线确定目的基因与OsActin检测的线性范围,对BR相关基因的相对表达量进行分析.