《表1 获取伴侣蛋白基因的PCR引物》

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《费希尔曲霉脂肪酶在毕赤酵母中的优化表达及高密度发酵》

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共表达伴侣蛋白的毕赤酵母工程菌构建：选取12种伴侣蛋白编码基因，分别为PDI、ERO1、KAR2、CPR6、RPL10、RPL38、RPL43、FES1、HAC1、SSA1、STL1和VGB。其中除VGB基因为直接合成外，其余均以毕赤酵母基因组为模板，经PCR获得，PCR引物序列见表1，将各基因分别连接在质粒pPICZA（或pPICZαA）多克隆位点的相同位置。将以上各重组质粒电转到GS115（pPIC9klip605）感受态细胞中。挑取单克隆用引物test-F（5′-AATTGCGACTGGTTCCAATTGAC-3′）和test-R（5′-ATTCAGATCCTCTTCTGAGATGAGT-3′）进行PCR验证。验证并测序成功的菌株即为相应共表达伴侣蛋白的脂肪酶毕赤酵母工程菌株，后续进行脂肪酶的表达检测。