《表2 实时定量PCR引物序列及参数》

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《饲粮添加白藜芦醇对断奶仔猪生长性能和肠道健康的影响》


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空肠组织黏膜屏障相关基因mRNA表达水平测定的具体操作步骤如下:(1)空肠黏膜总RNA的提取:称取0.08~0.12 g黏膜样品放入预冷的EP管中,并加入1 mL TRIZOL reagent(TaKaRa,日本)按照说明书提取总RNA,放置-80℃保存待用;(2)测定RNA浓度:在核酸蛋白仪上取RNA样品测出相应的A260和A280,样品检测数值处在1.8≤A260/A280≤2.0的范围为最佳;(3)cDNA的合成:按照Prime ScriptTM RT Reagents(TaKaRa,日本)的说明书进行;(4)引物设计由赛默飞世尔科技基因公司设计,见表2;(5)实时荧光定量PCR:按照RR820A(TaKaRa,日本)试剂盒说明操作方法检测基因mRNA表达水平,反应体系、反应程序和计算公式参照前人研究方法(刘莹莹等,2017)。