《表2 实时定量PCR引物序列及参数》

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《饲粮添加白藜芦醇对低出生重哺乳仔猪肝脏氧化还原状态和线粒体功能的影响》

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采用实时定量PCR法测定肝脏氧化还原和线粒体功能相关基因mRNA表达量。总RNA提取按照试剂盒（Trizol Reagent，TakaPa，日本）说明进行，RNA质量检测使用核酸蛋白检测仪（Beckman DU-800，CA，美国）检测260 nm和280 nm处吸光度，A260/A280比值表示RNA的纯度，该比值位于1.8～2.0之间表明RNA纯度较好。cDNA合成按照逆转录试剂盒（PrimeScript TM regent kit，TaKaRa，日本），具体操作步骤参照说明书进行，反应结束后-20℃保存。引物均由上海生工生物工程公司合成，引物序列见表2。样品的实时荧光定量PCR扩增，反应体系为10μL:5μL SYBR Premix Ex Taq TMⅡ（2×），0.5μL上游引物，0.5μL下游引物，3μL双蒸水，1μL cDNA模板。采用两步法PCR扩增标准程序：模板预变性，95℃，30 s；扩增，95℃，5 s，适宜的退火温度，30 s，共42个循环；溶解曲线，55～95℃，温度以0.5℃/s速率提升。组织中各基因的相对表达量以β-actin作为内参基因，采用2-△△Ct法计算[22]。