《表1 双荧光素酶报告基因载体构建引物序列》

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《靶向猪内质网应激通路的microRNAs预测与验证》

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标下划线的序列为XhoⅠ和NotⅠ酶切位点The underlined sequences are XhoⅠand NotⅠdigestion sites

根据交集mi RNA识别并结合靶基因ATF6(Genbank登录号：XM＿021089515.1）、PERK(Genbank登录号：XM＿003124925.4）、IRE1(Genbank登录号：XM＿005668695.3）、GRP78(Genbank登录号：XM＿001927795.7）和XBP1(Genbank登录号：NM＿001142836.1）的3'UTR靶点区域，设计引物（表1）用于扩增包含mi RNA靶位点的3′UTR区。以PK15细胞cDNA为模板进行PCR扩增。扩增产物纯化后和psiCHECK-2载体分别用XhoⅠ和NotⅠ于37℃双酶切30min，然后用T4 DNA连接酶于16℃过夜，再将连接产物转化入感受态细胞DH5α中。培养并挑取阳性克隆，送尚亚生物技术（杭州）有限公司测序。鉴定结果正确的阳性克隆，提取质粒，进行酶切验证。