《表2 用于xyl A基因敲除的引物》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《木糖和葡萄糖共发酵生产L-组氨酸》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

采用CRISPR/Cas9介导基因编辑方法敲除xylA基因，所涉及的引物如表2所示，操作过程参考文献[14，24]:以E.coli W3110基因组为模板，根据其xyl A基因的上下游序列设计上游同源臂引物（UP-xylA-S、UP-xylA-A）和下游同源臂引物（DN-xylA-S、DN-xyl A-A），并用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）扩增其上下游同源臂片段；上述片段通过重叠PCR的方法融合，获得用于xylA基因敲除的重组片段，构建p GRB-xylA质粒使用的含靶序列的DNA片段通过引物gRNA-xylA-S和gRNA-xylA-A的退火制得。制备E.coli HIS1的感受态细胞，先将pREDCas9质粒化转至E.coli HIS1中后，再制备感受态同时将重组片段和pGRB-xylA质粒同时电转至感受态细胞中，于32℃培养，待长出单菌落，经菌落PCR鉴定筛选出阳性转化子，再消除p GRB-xylA和pREDCas9质粒，获得菌株E.coli HIS1-1。