《表1 基因敲除菌株验证引物》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《一株阴环炭团菌(香灰菌)转化子形态变异的成因》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

为了验证目的基因TJAS01-V10012900是否已经成功敲除，本研究设计了4对引物，引物1和引物2的目标产物为基因的拟敲除区域，用于验证基因组是否还包含该区域；引物3和引物4分别定位转化子两同源臂上下游序列，用于验证潮霉素抗性基因是否插入至目标区域（图1A和表1）。引物设计采用NCBI提供的在线Primer-BLAST工具（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/）完成。转化子DNA的提取参照改进后的CTAB方法（傅俊生2007）。PCR采用25μL反应体系，包括12.5μL 2×Mix，0.5μL模板DNA，正向和反向引物（10pmol/μL）各0.5μL，11μL ddH2O。PCR扩增条件采用94℃预变性5min；94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸90s，重复35个循环；72℃终延伸10min。