《表4 组合突变位点的ΔTm、T50、t1/2和比酶活》

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《基于多重计算设计策略提高枯草芽孢杆菌脂肪酶的热稳定性》

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进一步测定了所有复合突变体的T50、t1/2和酶活，结果如表4所示。两点突变M2、M3、M4、M6、M7、M8的T50分别提高了1.0℃、1.7℃、1.9℃、3.2℃、1.2℃和0.8℃，t1/2分别提高了0.9 min、3.8 min、7 min、7.3 min、3.2 min和2.7 min，比酶活分别降低了51.3%、12.9%、55.1%、39.3%、4.4%和14%；三点组合突变M5、M9的T50分别提高了2.1℃、2.5℃，t1/2分别提高了10.3 min和9.5 min，比酶活分别降低了64.5%和43.0%；四点突变M11的T50提高了5.9℃，t1/2提高了14.8 min，比酶活是野生型的99.7%；六点组合突变M10的T50提高了8.4℃，t1/2提高了18.2 min，比酶活降低了55.2%。与全部六点的组合突变相比，将热稳定性提高同时酶活力较高的单点突变进行组合，可以维持较高的酶活力，尤其是I135V对酶活的破坏力较大，带有此位点的组合突变酶活降低较明显，说明酶的组合突变易受负突变影响，负突变效应较难通过其他突变弥补。