《表2 突变体酶的酶活及比酶活测定》

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《点突变提高甲酸脱氢酶(CbFDH)的酶活和催化效率》

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注:nd表示没有测量。

按照1.2.2所述方法诱导表达，然后离心收集细胞，用超声破碎仪破碎并离心去除细胞破碎沉淀，破碎上清液即为重组菌表达后的粗酶液。进一步利用镍柱纯化，得到突变体酶和野生型的纯酶样品。所有样品经处理后，进行SDS-PAGE电泳分析，见图3。得到的突变体酶的蛋白质相对分子质量大小为40 300，符合CbFDH利用载体pET28a（+）表达后的大小。同时可以看出，除了V93I，其余突变体酶的蛋白质质量浓度比野生型酶有所下降。进一步对突变体酶的酶活、比酶活及蛋白质质量浓度进行测定，结果见表2。表明突变体酶V93I的体积酶活为19.37 U/mL，比野生型提高34.7%，比酶活为6.39U/mg，相比野生型提高22.6%。突变体酶V93A和V93相比野生型，酶活分别降低66%和92.9%，比酶活分别下降26.1%和79.8%。而V93G已经完全失活，在之后酶学性质研究中将不再涉及。上述结果可以看出，CbFDH酶活随着V93位氨基酸残基疏水性的增强而提高（突变体酶V93L除外），其中V93I的酶活和比酶活均为最高，相比野生型酶更加有优势。