《表2 DNA条形码鉴定所用引物》

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《基于DNA条形码技术的海南龙血树和剑叶龙血树分子鉴定》

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选择8个DNA条形码引物进行扩增，包括1个间区序列ITS2和7个叶绿体基因组片段（pbsH-petB，matK，rbcL，rpoB，rpoC1，trnH-psbA和trnL-trnF）（表2）。PCR反应体系为50μL，包括DNA模板0.5μL，上、下游引物各1μL，5μL 10×PCR缓冲液，dNTP 8μL，0.5μL Taq酶，补水至50μL。反应条件为：95℃，5 min后，95℃，30 s，58℃，30 s，72℃，40 s共35个循环，最后72℃，5 min。2.0%凝胶检测后进行胶回收，将片段连接至pMD18-T载体进行转化菌液过夜平板培养，次日每个片段挑取单克隆5份至上海生工使用ABI3730XL测序仪进行双向测序，确定其核苷酸序列。