《表2 DNA条形码引物信息》

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《蓝莓栽培品种的DNA条形码》

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取硅胶干燥的蓝莓叶片约30 mg，用植物基因组DNA提取试剂盒（北京庄盟）提取蓝莓总DNA，具体操作详见说明书。提取的总DNA于-20℃保存备用。选用rpoB、psbA-trnH、ycf5、rbcL、rpoC、mat K、ITS、ITS2（Liu et al.，2012；CBOL Plant Working Group，2009）条形码进行PCR扩增，引物信息见表2。PCR反应体系30μL，包括2×Taq PCR Master Mix（庄盟生物）15μL，浓度为10μmol·L-1的上、下游引物各0.75μL，ddH2O 12μL，模板DNA 1.5μL。各条形码优化后反应程序如下:（1）ITS2反应程序:95℃5 min；95℃20 s，58℃20 s，72℃40 s，30循环；12℃保存。（2）psbA-trnH、rpoC反应程序:95℃5 min；95℃20 s，56℃20 s，72℃40 s，30循环；12℃保存。（3）rbcL反应程序:95℃5 min；95℃20 s，56℃20 s，72℃1 min，30循环；12℃保存。（4）rpoB反应程序:95℃5 min；95℃20 s，48℃20 s，72℃1 min，30循环；12℃保存。（5）matK反应程序:95℃5 min；95℃20 s，48℃20 s，72℃1 min，5循环；95℃20 s，53℃20 s，72℃1 min，25循环；12℃保存。