《表1 RT-PCR引物序列》

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《黄芩苷对脂多糖诱导的大鼠滑膜RSC-364细胞自噬的抑制作用》

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采用RNA提取试剂盒提取各组大鼠滑膜RSC-364细胞总RNA。采用逆转录cDNA试剂盒（BioTake）以总RNA为模板，进行逆转录cDNA；RT-PCR反应体系（25μL）包括：2Taq Master Mix 12.5μL、双蒸水9.5μL、上游引物1μL、下游引物1μL和cDNA 1μL。PCR扩增以逆转录cDNA为模板，在94℃、3min条件下进行初始变性，经过20个循环，94℃、30s变性，65℃、30s退火和72℃、1min延伸过程，72℃、10min充分延伸；其次点样，100V、40min电泳，采用Image J 6.0软件分析扩增后的琼脂糖凝胶电泳条带灰度值，进行目的基因mRNA半定量分析，计算各组RSC-364细胞中PI3k、Akt、mTOR、Beclin1、Atg5、Atg7、Atg12和LC3-ⅡmRNA表达水平。目的基因mRNA表达水平=目的基因条带灰度值/内参GAPDH条带灰度值。以上实验至少重复3次。RT-PCR引物序列见表1。