《表2 31℃下差异表达lncRNA引物序列》

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《不同温度下TMV侵染枯斑三生烟的LncRNA差异表达》

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使用Primer Premier(V6.0.0）对各处理DElncRNA进行荧光定量引物设计（表1、表2）。使用ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix(Vazyme，中国）实时荧光定量试剂盒，利用Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System(ABI，美国）进行q RT-PCR反应。总反应体系为20μL:SYBR qPCR Master Mix 10μL，PCR正反向引物各0.4μL，作为模板的逆转录所得cDNA 2μL，RNase-free water 7.2μL。扩增条件为95℃预变性30 s；95℃反应10 s和60℃反应30 s，循环40次；95℃反应15 s和60℃反应1 min，95℃反应15 s分析融解曲线。依据融解曲线分析引物的特异性。根据红花烟草肌动蛋白（actin）序列（序列号：GQ339768），设计荧光定量引物（正向引物：5′-TGAGACATTCAACGTTCCGGC-3′，反向引物：5′-GTTAGGTCACGGCCAGCAAG-3′）。以actin为内参，根据2-ΔΔCt法[25]计算基因相对定量的表达，借助SPSS(V24.0.0）进行数据分析，利用Excel 2016绘制图表，得到DElnc RNA表达情况，对测序结果进行验证。