《表1 引物序列：2型糖尿病患者外周血环状RNA差异表达分析》

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《2型糖尿病患者外周血环状RNA差异表达分析》

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抽取受试者静脉血5 ml放入EDTA抗凝管，颠倒混匀后于―20℃或―80℃冰箱保存备用；Trizol提取血中总RNA，严格按照试剂盒说明书操作；总RNA使用分光光度计测定浓度、纯度；合格样品使用RNase R去除线性RNA后进行c DNA扩增和荧光标记，使用Agilent系统进行杂交并清洗，于Axon基因芯片扫描仪上成像，Gene Pix Pro 6.0软件分析circ RNA差异表达谱。两组分别随机选取3例（按照实际年龄匹配）共6张芯片检测circ RNA[8-9]，获得circ RNAs差异表达谱后扩大样本量。芯片实验初筛结果中进一步选择差异倍数（FC）较大的circ RNAs进行q RT-PCR验证。所有引物序列见表1。总RNA逆转录得到c DNA模板，采用7900型号q RT-PCR仪进行扩增，circ RNA表达以U6作为内参进行标准化，2-△△Ct计算FC[10]。运用基因软件进行预测，挑选出5个最高匹配值mi RNA结合位点。采用DAVID软件对芯片和q RT-PCR实验结果一致的circ RNAs进行数据分析，计算分类、包含基因、P值等内容，再将结果导入Pathway Studio 5.0软件，自动输出相关的信号通路和P值。