《表1 实时荧光定量PCR引物序列》

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《雷美替胺对猪卵母细胞体外成熟和孤雌胚胎发育的影响》

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对照组的孤雌囊胚进行胚胎发育相关基因mRNA表达情况分析。总RNA提取使用TRIzol Reagent（Invitrogen），具体方法参照说明书。总RNA浓度及纯度使用Nano Drop 2000分光光度计（Thermo Fisher Scientific）进行定量。使用Clontech试剂盒（TaKaRa）将提取的总RNA反转录为cDNA。反应体系20μL:1μL cDNA，上、下游引物各0.4μL(10 pmol/μL），10μL SYBR Green Premix Ex Taq，8.2μL NFW。反应条件：95℃变性30 s、退火20 s、72℃延伸30 s，共40个循环。本实验所用引物见表1，GAPDH为看家基因。实施荧光定量PCR结果采用2-△△Ct法。