《表1 αvβ3mRNA、Hox10mRNA、MMPs-9mRNA引物序列及扩增片段》

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《不明原因不孕妇女着床期子宫内膜αvβ3、Hox10、MMPs基因的表达》

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（1）所有研究对象均按照常规方法在着床期（即排卵后5～7 d）行内膜搔刮，取出组织装入Eppendof管投入液氮罐冻存，后期统一采用RT-PCR方法检测。（2）子宫内膜中αvβ3mRNA、Hox10mRNA、MMPs-9mRNA的表达检测方法。（3）设计并合成引物按照Primer 5.0软件方法设计完成PCR引物，由于β-actin的稳定性较强，所以可作为内参照物。引物序列及扩增片段均取北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司设计的引物，结果见表1。（4）采用RT-PCR技术对组织标本进行检测并提取细胞总RNA:取100 mg的组织标本于匀浆器中，并加入GIT变性液600μl后均浆，吸取500μl于Eppendorf管中，在每管加入50μl的pH=4.02的MNaAc后充分混匀，放入冰浴中10～15 min，然后在4℃的环境下行12 000 rpm离心10 min，吸取其上清液于另一个Eppendorf管中后加入等体积的异丙醇，放置于-20℃的环境下1 h。接着在4℃的环境下行15 000 rpm离心10 min，将上清液弃去后加入100μl GIT变性液，使其慢慢降解沉淀后再加入等体积的异丙醇，放置于-20℃的环境下1 h，然后在4℃环境下行15 000 r/min离心10 min，弃去上清，用无水乙醇冲洗，将上清液弃去，在常温下自然晾干后与适量的无Rnase的去离子水相溶，即可以直接应用，也可加入1 ml无水乙醇置于-70℃环境下保存备用[7]。（5）根据常规操作进行逆转录反应和聚合酶链反应，反应结束后采用电泳进行鉴定。（6）定量分析:根据凝胶电泳图像的特点，将其输入到凝胶分析系统，并运用1D Image Analysis Software技术分析其表达强度（相对系数=细胞因子表达强度/β-actin表达强度）[8]。