《表2 q PCR所用引物》

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《皱纹盘鲍基质金属蛋白酶基因的克隆与表达分析》

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根据克隆得到的皱纹盘鲍Hdh-MMPs基因序列设计q PCR用引物（见表2），以EF-1α作为内参基因，利用TransStartTop Green qPCR SuperMix（TransGen Biotech）分析Hdh-MMPs基因在皱纹盘鲍各组织及副溶血弧菌感染前后的表达差异性。q PCR反应体系（10μL）如下:2×q PCR SuperMix5μL，正向引物（10μmol/L）0.2μL，反向引物（10μmol/L）0.2μL，50×Passive Reference Dye0.2μL，cDNA 1.0μL，ddH2O 3.4μL。于ABI 7300仪器（Applied Biosystems）中进行两步法PCR扩增，程序如下:94℃预变性30 s；94℃变性5 s，60℃延伸31 s（荧光采集），循环40次；扩增结束后，从55℃升温至94℃制备溶解曲线。每个样品设置3个重复，每组反应均设置无模板对照。