《表1 Q-PCR所用引物》

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《三维共培养体系促进去分化的软骨细胞再分化的实验研究》

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注:ColⅡ-Ⅱ型胶原基因；ColⅠ-Ⅰ型胶原基因；Acan-蛋白聚糖基因；Rpl4-核糖体蛋白L4

将各组第28天收集的cDNA进行Q-PCR检测，观察Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原及蛋白聚糖基因的表达情况，另外提取平面培养的P4软骨细胞的cDNA以作对照。所用的引物见表1。基本过程是，将微球取出至无RNA酶的EP管中，加入1 000μl RNA提取试剂（total RNA isolation reagent，TRIzol，赛默飞公司，美国），用匀浆仪磨碎，再经氯仿粹取，异丙醇沉淀，75%乙醇洗涤后逆转录成cDNA（第一链cDNA合成试剂，evertAid first strand cDNA synthesis kit，赛默飞公司，美国）。然后用实时荧光定量PCR仪（ABI 7500，ABI公司，美国）进行Q-PCR检测。所用的试剂盒为宝生物染料法荧光定量试剂盒（SYBR Premix Ex Taq II，TaKaRa公司，日本）。扩增方案是:第一步，95℃进行30 s，1个循环进行初步变性；第二步，95℃下保持5 s进行变性；60℃保持30 s以退火，重复40个循环；第三步，72℃下进行30 s的延伸。