《表1 Q-PCR使用引物》

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《大豆GmANKTM家族非生物胁迫生物信息学分析》

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依据试剂盒说明书，使用Ultrapure RNA试剂盒（CWBIO，China）提取叶片RNA。除去基因组DNA后，使用TransScript One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix（TRANSGEN BIO，China）获得第一链cDNA。使用TransStart Top Green qPCR SuperMix (TRANSGEN BIO，China）实时定量PCR (qRT-PCR），ABI 7 300实时定量PCR系统（Applied Biosystems，USA）开展试验。使用NCBI引物设计网站（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/），依据GmANKTM3、GmANKTM16、GmANKTM19、GmANKTM36和GmANKTM49，引物设计见表1。扩增条件为：将15μL反应体系加热到95℃2 min，然后以95℃5 s，60℃15 s，72℃10 s为一个循环，共40个循环。