《表2 甲基化特异性PCR所用引物》

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《DNMT3a通过提升基因内部甲基化介导紫杉醇诱导的LINE-1异常表达》

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收集约1×106个细胞，使用基因组DNA提取试剂盒（Axygen，美国）提取细胞基因组DNA，采用微量紫外分光光度计测定DNA浓度以及纯度。500 ng DNA使用重亚硫酸盐修饰试剂盒（ZYMO，美国）进行修饰。以修饰后的DNA作为模版，使用SYBR Primix Ex Taq II（TaKaRa，日本）在Real-time PCR仪器上检测LINE-1启动子区域和基因内部的甲基化修饰水平。LINE-1启动子区段对应的引物为LINE1-Promoter-MSP，而LINE-1基因内部两个区段S1和S2分别对应的引物为LINE1-GB1-MSP和LINE1-GB2-MSP。反应条件为：95℃10 min，95℃10 s，60℃30 s；40个循环。采用2–ΔΔCt进行相对定量分析。所用引物序列见表2。