《表1 p 1 6基因启动子甲基化特异性P C R分析所用引物》

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《20(S)-人参皂苷Rg3抗肝癌作用及对p16基因表达的影响》

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各实验组收集细胞，提取DNA，进行纯化及亚硫酸氢盐修饰，设计合成p16甲基化（M）和非甲基化（U）引物（见表1），进行PCR反应，PCR的反应体系（30μl）:PCR Mixture 2 X Mix 15μl，U或M-Primer F 0.5μl，U或M-Primer R 0.5μl，Modified DNA 1～5μl，余下体积用去离子水补齐至30μl。反应条件:94℃预变性3min，94℃变性30S，退火30S，72℃延伸30S，循环40次，72℃延伸7min，产物4℃保存。取10μl PCR反应产物行琼脂糖凝胶电泳，并用凝胶成像系统分析仪采集图像。结果判定:甲基化引物扩增出现条带，则判断该组织甲基化阳性；非甲基化引物扩增出现条带而甲基化未扩增出条带，则判定该组织甲基化阴性。甲基化和非甲基化引物均扩增出条带，判定该组织部分甲基化。部分甲基化亦表示甲基化阳性。