《表1 去甲肾上腺素转运体SLC6A2基因启动子区域甲基化PCR及测序引物》

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《老年慢性心力衰竭患者去甲肾上腺素转运体SLC6A2基因启动子区甲基化水平及其与预后的相关性》

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记录患者的性别、年龄、病程、收缩压、舒张压、饮酒史、吸烟史、体重指数等一般临床资料及与心力衰竭及预后相关的潜在影响因素。清晨抽取患者空腹肘静脉血，按照基因组DNA提取试剂盒（德国QIAGEN公司）操作说明提取DNA。对SLC6A2基因启动子区相对集中CpG岛A、B、C和D共4个相关片段进行分析，使用DNA甲基化率[甲基化率=甲基化峰值高度/（甲基化峰值高度+非甲基化峰值高度）×100.00%]来评价4个相关DNA片段甲基化水平。依据相关操作步骤[5]对甲基化修饰及纯化亚硫酸盐修饰。使用PyroMark Assay Design 2.0对4个相关片段的引物进行设计（引物合成工作由华大基因公司完成）。片段A为反向测序，所有的引物碱基序列见表1。PCR的反应条件:修饰的DNA100 ng、1μl dNTP（10μmol/L）、5×buffer GC（美国KAPABiosystems公司）10μl，50 pmol/μl上下游引物各1μl、TaqDNA聚合酶2 U；扩增条件:95℃温度下预变性3 min，94℃温度下变性30 s，51℃温度下退火30 s，72℃温度下延伸1 min，共完成40个循环，72℃温度下变性7 min，4℃温度下保持。