《表1 实时定量PCR所用基因特异性引物》
RNAiso Plus Total kit(Takara,Japan)提取白色脂肪和褐色脂肪的总RNA,反转合成cDNA,PCR使用PrimeScript RT Reagent试剂盒(Takara)扩增引物(见表1)。定量PCR扩增在Stratagene定量PCR仪(Stratagene,USA)上进行。PCR的反应体系为:6.25μL 2×SYBRPremix EX TaqTMmaster mix(Cat.NO.DRR041D,TaKaRa,Japan),1μL cDNA模板和0.2μmoL/L引物。反应程序为:95℃10 s;95℃5 s,60℃20 s,72℃20 s,共进行40个循环。2-ΔΔCt法检测RT-PCR实验中分析各基因表达的相对差异。ΔΔCt值由以下公式得到:ΔΔCt=(Ct靶基因-CtGAPDH)处理组-(Ct靶基因-CtGAPDH)对照组。靶基因表达水平的变化有下面公式求出:靶基因表达水平差异倍数=2-ΔΔCt。
图表编号 | XD00179273400 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.06.30 |
作者 | 张欣、杨英、安晓羽、谷艳琪、张引、麻炎、孙利婷、林芳、武强强、王亚娜、杨慧娣 |
绘制单位 | 内蒙古医科大学基础医学院、内蒙古医科大学基础医学院、内蒙古医科大学基础医学院、内蒙古医科大学研究生院、内蒙古医科大学基础医学院、内蒙古医科大学基础医学院、内蒙古医科大学基础医学院、内蒙古医科大学基础医学院、内蒙古医科大学基础医学院、内蒙古医科大学基础医学院、内蒙古医科大学研究生院、内蒙古医科大学基础医学院、内蒙古医科大学研究生院、内蒙古医科大学基础医学院 |
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