《表1 本研究中使用的引物》

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《小麦Pinb基因启动子区CRISPR/Cas9基因编辑载体的构建》

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（2）引物磷酸化退火形成双链:Pinb基因的sgRNA1的引物对应的是Pinb-TaU6-gR1F和Pinb-TaU6-gR1R（表1），sgRNA2的引物对应的是Pinb-TaU6-gR2F和Pinb-TaU6-gR2R（表1），引物中的下划线碱基部分分别与p YPQ131D和pYPQ132C载体中的序列匹配。分别将sgRNA1和sgRNA2的2条引物进行磷酸化，直接退火形成双链，程序在PCR仪中按下列条件运行:37℃30 min，95℃5 min，5℃/min（0.08℃/s）的速度将温度降至25℃。或者是沸水中煮5 min，之后自然冷却至室温。