《表2 不同辅因子时重组cce4228蛋白催化SSA的酶动力学参数》

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《蓝杆藻ATCC51142中琥珀酸半醛脱氢酶的原核表达及生化表征》

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注：*：辅因子的米氏常数.

在标准试验条件下，当用琥珀酸半醛作为底物，NADP+或NAD+为辅因子时，重组cce4228蛋白的动力学活性符合由米氏方程推导的完全抑制方程：V=Vmax/（1+Km/[S]+[S]/Ki）。详细酶动力学参数如表2所示。以NADP+（0.5 mmol/L）作为辅因子时，测得的Vmax为0.26±0.02μmol/（L·s），cce4228蛋白与底物的Km为0.008±0.003 mmol/L，cce4228蛋白与底物的抑制常数（Ki）为0.8±0.2 mmol/L，反应所用的cce4228蛋白的浓度为0.067 5μmol/L，因此可以计算得到kcat为3.85 s-1，kcat/Km为4.81×105 L/（mol·s）（图6A）。当固定琥珀酸半醛浓度为0.2 mmol/L，改变NADP+浓度时，测得Vmax为0.239±0.008μmol/（L·s），cce4228蛋白与NADP+的Km为0.034±0.002 mmol/L（图6B），通过计算得到kcat为3.54 s-1，kcat/Km为1.04×105 L/（mol·s）。以NAD+（10 mmol/L）作为辅因子时，测得的Vmax为0.23±0.01μmol/（L·s），cce4228蛋白与底物的Km为0.004 1±0.000 5 mmol/L，cce4228蛋白与底物的Ki为0.052±0.004 mmol/L，反应所用的cce4228蛋白的浓度为0.135μmol/L，因此可以计算得到kcat为1.70 s–1，kcat/Km为4.15×105 L/（mol·s）（图6C）。当固定琥珀酸半醛浓度为0.02 mmol/L，改变NAD+浓度时，测得Vmax为0.35±0.01μmol/（L·s），cce4228蛋白与NAD+的Km为1.72±0.17 mmol/L（图6D），通过计算得到kcat为2.59 s–1，kcat/Km为1.51×103 L/（mol·s）。由此可以得出cce4228蛋白偏好使用NADP+辅因子，为一类NADP+-依赖型的琥珀酸半醛脱氢酶。