《表2 实验中所用引物：金属离子对重组深渊滕黄单胞菌低温α-淀粉酶LamA的活性和稳定性影响》

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《金属离子对重组深渊滕黄单胞菌低温α-淀粉酶LamA的活性和稳定性影响》

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注：下划线为突变的氨基酸，红色为定点突变的核苷酸位点.

以pET-24a/LamA为模板，以突变位点为中心设计表2所示引物，使Asn120、Gln185、Asp200、His233、Met234和Thr224突变为性质相反的氨基酸。以pET-24a/LamA为模板，将含有突变位点的引物作为扩增引物，PCR扩增体系（50μL）:5×Prime STAR GXL Buffer 10μL，d NTP Mixture（2.5 mmol/L）4μL，Primer 1（20μmol/L）1μL，Primer 2（20μmol/L）1μL，Template 0.5μL，Prime STAR GXL DNA polymerase 2μL，ddH2O 31.5μL。PCR反应条件：98°C 2 min；98°C 10 s，60°C 15 s，68°C10 s/1 kb，共30个循环；72°C 2 min。扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析，并将目的片段切胶回收纯化，得到含有突变位点的线性片段；5′-磷酸化处理使其自连为环状质粒，转化进感受态细胞BL21中；挑取阳性克隆，提取质粒，进行酶切和测序验证。