《表1 引物序列：Notch信号途径在儿童结核病中的作用研究》

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《Notch信号途径在儿童结核病中的作用研究》

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应用实时荧光定量PCR法检测受体Notch1～4，配体DLL1、3、4和JAG1、2，以及下游靶基因Hes1和Hey1的mRNA水平。试剂盒采用QuantiFast?SYBR?Green?PCR?Kit（德国Qiagen公司）。GenBank中检索目的基因和内参基因GAPDH?cDNA序列，应用DNA?MAN软件设计引物（表1），引物由上海生工生物股份有限公司合成。反应体系（20?μL）:2×SYBR?Green?PCR?Master?Mix?10?μL，cDNA?1?μL，上、下游引物各0.5?μL（5?μmol/L），ddH2O?8?μL。反应条件:95℃预变性5?min；95℃?10?s，60℃30?s，40个循环，并绘制熔解曲线。记录每个反应管中的荧光信号到达所设定的域值时所经历的循环数即Ct值，结果以2-ΔΔCt法对目的基因进行定量。