《表2 引物设计：ACAT1低甲基化在儿童肾病综合征发病机制中的作用研究》

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《ACAT1低甲基化在儿童肾病综合征发病机制中的作用研究》

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取患儿外周静脉血1 ml，采用Ficoll法提取外周静脉血单个核细胞，采用Trizol法提取单个核细胞的总m RNA，逆转录成第一链c DNA。q PCR法检测ACAT1 m RNA及Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b m RNA表达水平。反应体系20μl，包括10μl Fast Start Universal SYBR Green Master的PCR反应试剂（瑞士Roche公司）、每个引物各1μl(300 nmol/L）、2μl c DNA模板和6μl去离子水，并在Roche Light Cycler480Ⅱ荧光定量PCR仪器中进行PCR扩增，反应条件为95℃预变性5 min，95℃10 s，60℃20 s，72℃20 s，共40个循环。所有样本均设置两个副管，以β-actin作为内参，引物设计见表2。数据结果以2-ΔCt相对定量表示。