《表3 PCR引物设计：去乙酰化酶SIRT1在新生儿坏死性小肠结肠炎发病机制中的作用研究》

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《去乙酰化酶SIRT1在新生儿坏死性小肠结肠炎发病机制中的作用研究》

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将采集的肠道标本，按照RNA提取液试剂盒说明书行总RNA提取，逆转录为cDNA。按照上海生工生物工程股份有限公司提供的SIRT1序列，设计引物（见表3）。引物稀释成10μmol/L，优化引物特异性和退火温度条件后制备PCR反应体系，总反应体积20μL，94℃预变性2 min，94℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸30 s，共循环35个。为明确产物特异性，建立溶解曲线，于实时荧光定量仪上直接读数。